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幸运28技巧:自身抗体(AUTO-1)操作规程

曾道人计划 www.c0n9n.cn 日期:2010-08-21 21:08:29 来源: 检验在线 点击:

1.检验目的

    通过酶免疫分析法(EIA)筛查和检测血清或肝素抗凝全血中抗各种特异性核抗原的自身抗体,用于自身免疫性疾病的辅助诊断。

2.方法原理

采用酶免疫斑点技术来检测抗体??乖苑稚⒌牡阕幢还潭ㄔ诠滔嗄ど?。将测定标本加入到反应管内,插入测试条,使标本的抗体同固定在测试条固相膜上的测定抗原反应。然后祛除非特异的结合物质,再加入结合有碱性磷酸酶的抗人抗体同已固定的人抗体反应,最后将测试条移入酶底物试剂同碱性磷酸酶发生显色反应产生容易观察、明显的蓝紫色斑点。

3.性能指标

此方法快速简便、特异性强、检测灵敏度度0.5ng/ml。

4.标本收集

4.1标本类型:静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本(抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA,抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯,使用的比例以厂家推荐为准);其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液可以作为检测标本,但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。

4.2标本留?。阂钥崭刮?,收到标本后最好立即离心留取血清或血浆(凝固血应待其充分凝固后收集血清),不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝,使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。

4.3标本保存:留取的标本最好在3小时内检测,不能立即检测的应放置于2-8℃最长达14天(可以含有凝块但要密闭以防蒸发),或者-10℃最长达14天(不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞)。

4.4标本容器:盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管

4.5标本外送:如涉及到需要外送的标本,必须以规定的容器(0.5ml塑料离心管)存放并密封,并根据邮寄规则和要求进行包装,运送时还要放入冰袋(2-8℃)或干冰(-10℃)由专人运送至指定地点指定接收人。

4.6拒收标本:凡与4.1-4.5所述内容不符的标本,检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因,并提出解决的方案或建议。

5.分析系统

5.1分析试剂:为美国GenBio公司提供的自身抗体试剂盒,规格为25test/盒,2-8℃贮存,有效期12个月;在效期内使用试剂。

6.操作方法

6.1将测试条在清洗杯中预湿30-60秒。

6.2将测试条插入稀释液反应管#1中,快速上下运动5-10次,以便混合试剂核标本。放置5分钟。

6.3取出测试条,放入清洗杯中。为使测试条上的膜孔充分清洗,需来回快速运动5-10秒。

6.4将测试条插入稀释液反应管#2中,快速上下运动5-10次,以便混合试剂核标本。放置5分钟。

6.5取出测试条,放入清洗杯中。为使测试条上的膜孔充分清洗,需来回快速运动5-10秒。

6.7将测试条插入稀释液反应管#3中,快速上下运动5-10次,以便混合试剂核标本。放置15分钟。

6.8测试条在清洗杯中放置5分钟。

6.9将测试条插入稀释液反应管#3中,快速上下运动5-10次,以便混合试剂核标本。放置5分钟。

6.10取出测试条,放入清洗杯中。为使测试条上的膜孔充分清洗,需来回快速运动5-10秒。

6.11显色并等待测试条干燥,对于临界结果必须让测试条在空气中干燥后再判断。

7.质量控制操作程序

7.1测试条顶端处的两个膜孔作试剂质控。最顶端是阳性试剂质控,必须显示阳性测定结果才有效;下一个膜孔是阴性试剂孔,必须显示阴性检测结果才有效。

7.2质控结果登记到本年度的“免疫室定性检测项目室内质控登记表”。

7.3一旦发现失控,应即时查找和分析原因,并在该结果栏作详细的批注和记录解决的过程;失控情况处理及原因分析详见8“失控处理”。

7.4每月进行质控小结。并将原始数据打印和存盘留档。

8.失控处理操作程序

8.1失控情况处理:操作者在分析质控结果时,如发现质控违背了控制规则,应填写失控报告单,上交专业室主管(组长),由专业室主管(组长)做出是否发出或重测与质控品相关的该批次病人标本检验报告的决定。

8.2失控原因分析:失控信号的出现受多种因素的影响,这些因素包括操作上的失误、试剂、对照物的存贮条件改变等等。失控信号一旦出现就意味着与测定质控品相关的该批病人标本报告可能作废,此时首先要查明导致失控的原因,是对照物本身的原因还是对照物以外的原因。如是对照物以外的原因则应判为真失控,与对照物相关的同批次病人标本重新检测;如是对照物本身的原因,则判为假失控,与对照物相关的同批次病人标本不必重测,可以发出报告。当失控信号出现时,可以采取以下步骤去寻找原因:

8.2.1立即重测同一对照物。此法主要用于查明人为误差,每一步都应该认真仔细的操作,以查明失控的原因;另外,这一步还可以查出偶然误差,如是偶然误差,则重测的质控结果应在允许范围(在控),可以认为该批次的病人标本不必重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。

8.2.2另一试剂盒,重测失控项目。检查试剂是否过期或贮存环境,更换试剂盒重新检测对照物,如在控则说明试剂存在问题,该批次病人标本应重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。

8.2.3专家帮助。前2都未能得到在控结果,如果其他同类型检验项目在控,则需要联系试剂厂家寻求技术帮助;如果其他同类型项目也失控,则需要与仪器厂家工程师取得联系了。

9.注意事项

9.1本试剂盒只用于体外诊断。本试剂盒是一个完整的分析系统,不能用其他制造商的试剂或其他英明道免疫法检验系统的试剂来替代,这些替代会影响测试结果。不要用过期的试剂盒。清洗液必须是分析级的去离子水或蒸馏水。

9.2某些试剂中含有叠氮钠,它可与铅、铜反应形成高致密的金属叠氮物。必要时可用大量的水冲洗,组织叠氮物形成。

9.3注意潜在的生物源性危险。

9.4试剂和测试条在2-8℃储存。试剂使用前放置室温(15-30℃)。若置于加热的专用恒温仪上必须在1小时内使用。应避免可引起错误结果的试剂污染。

10.结果计算

10.1 结果通常有三类:

       无反应:阴性结果

       弱反应:斑点不易识别并被看成阴性结果

       有反应:阳性结果(“斑点”)

11 结果解释

11.1 无反应:阴性结果

      弱反应:斑点不易识别并被看成阴性结果

      有反应:阳性结果(“斑点”)

12.安全防护

12.1对任何一份标本(包括质控品、标准品及检测试剂等)都应视其为具有传染性,操作人员在工作时应戴乳胶手套、穿工作服。

12.2一旦发生标本容器划破手或身体、液体溅进眼睛等粘膜处,应立即用大量的水冲洗,同时向上级医师或科领导报告,必要时施以丙种球蛋白预防。

13.常见的误差源

13.1试剂原因:试剂过期、定标液过期等。

13.2标本原因:标本处理、收集不符合要求等。

13.3人为原因:结果填写错误等。

14.参考文献

14.1美国GenBio公司自身免疫检查试剂盒-1说明书。
 

 


(责任编辑:labweb)

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